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人参皂苷Rg3通过Ca2+/CaM信号系统抑制胃癌BGC-823细胞增殖及其可能的机制

 

发布时间:2024-03-20    字号:【

 本宣传仅供医学药学专业人士阅读,请按医师或药师指导下使用。
本文是辽宁医学院附属第一医院孙大鹏、大连富生天然药物开发有限公司富力等人共同发表在《中国肿瘤生物治疗杂志》上的文章。目的是研究人参皂苷Rg3是否是通过降低钙调蛋白(calmodulin,CaM)的表达来促进胃癌BGC-823细胞的凋亡及其可能的机制。研究表明,Rg3可能是通过降低CaM的表达来抑制NF-κB信号通路的活性,进而抑制胃癌BGC-823细胞的增殖和侵袭、促进其凋亡。

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材料与方法

 

胃癌BGC-823细胞的培养及实验分组:

BGC-823细胞保持原培养液置细胞培养箱1d后,更换为新鲜5ml含10%胎牛血清的L-15培养基,置5%CO₂、37℃孵育箱中培养,待细胞增长至80%~90%汇合时,用0.25%胰蛋白酶消化1~2min,用吸管反复吹打贴壁细胞,使之脱离瓶壁充分分散。将细胞悬液按1:2稀释,传到新培养瓶中,每瓶加入5ml新鲜培养液继续培养。取对数生长期细胞制成5×104/ml单细胞悬液,接种于96孔板,每孔200μl,分别加入相应药剂作用细胞48h。按加药的不同分为对照组(不加药处理)、Rg3(50μg/ml)组、Ad-CaM组和Rg3(50μg/ml)+Ad-CaM组(加入Ad-CaM的目的是观察Ad-CaM是否能影响Rg3对CaM表达的影响),每组设4个平行孔。

 

检测指标:

MTT法检测细胞增殖的影响、流式细胞术检测细胞凋亡的影响、Transwell实验检测细胞侵袭的影响、Western blotting检测细胞内CaM、IκB、CaMKⅡ和NF-κB表达的影响。

 

统计学处理:

采用SPSS13.0统计软件,所有数据以x平均±s表示,采用ANOVA方法进行检验,以P<0.05表示差异具有统计学意义。

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结果

 

Rg3和/或Ad-CaM对胃癌BGC-823细胞内CaM表达的影响

Western blotting检测结果(图1)显示,各组胃癌BGC-823细胞中均存在CaM的表达,但与对照组比较,Rg3组CaM的表达明显被抑制(13.24±0.28 vs 22.53±0.54,P=0.027),而Ad-CaM组(29.63±0.61,P=0.036)和Rg3+Ad-CaM组(27.82±0.58,P=0.041)CaM的表达均明显增强。


Rg3和/或Ad-CaM对胃癌BGC-823细胞的生长抑制作用

MTT检测结果显示,Rg3组细胞增殖抑制率高于对照组,差异具有统计学意义[(81.96±4.12)% vs (35.32±2.04)%,P=0.014];而Ad-CaM组[(14.64±1.05)%,P=0.032]和Rg3+Ad-CaM组[(16.17±1.31)%,P=0.036]细胞增殖抑制率均显著低于对照组。

 

Rg3和/或Ad-CaM对胃癌BGC-823细胞凋亡的影响

流式细胞术检测结果(图2)显示,Rg3组细胞的凋亡率显著高于对照组[(58.96±3.56)% vs (28.80±1.41)%,P=0.029];Ad-CaM组[(15.94±1.68)%,P=0.037]和Rg3+Ad-CaM组[(16.00±1.01)%,P=0.039]细胞凋亡率显著低于对照组。


Rg3和/或Ad-CaM对胃癌BGC-823细胞侵袭能力的影响

Transwell实验检测结果(图3)显示,Rg3组BGC-823细胞穿膜细胞数显著低于对照组[(31±2) vs (86±5)个,P=0.029];Ad-CaM组[(164±9)个,P=0.023]和Rg3+Ad-CaM组[(156±8)个,P=0.026]穿膜细胞数显著高于空白对照组。


Rg3和/或Ad-CaM对BGC-823细胞NF-κB、CaMKⅡ和IκB的影响

Western blotting检测结果(图4)显示,与空白对照组比较,Rg3组细胞内NF-κB和CaMK Ⅱ的表达均被明显抑制(P=0.012,P=0.015),IκB的表达被明显增强(P=0.031);Ad-CaM组和Rg3+AdCaM组细胞内NF-κB(P=0.020,P=0.029)和CaMK Ⅱ(P=0.023,P=0.031)的表达均被明显增强,而IκB的表达均被明显抑制(P=0.031,P=0.033)。


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结论

 

本研究结果显示,Rg3能够抑制BGC-823细胞内NF-κB和CaMK Ⅱ的表达、促进IκB的表达;Ad-CaM和Rg3+Ad-CaM的作用则相反。推测Rg3可能是通过抑制CaM的表达来降低NF-κB信号通路的活性,进而抑制胃癌细胞的生长。综上,Rg3可以抑制胃癌BGC-823细胞的增殖,其可能是通过降低Ca2+/CaM信号通路的表达,进而抑制NF-κB信号通路的活性来实现的。

文献来源:中国肿瘤生物治疗杂志,2015年4月,22(2)。

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