人参皂苷Rg3对小鼠肝癌血管形成的影响

造  模

1.1 肝癌细胞株的传代

将小鼠H22肝癌细胞株常规复苏、培养扩增，调整细胞悬液密度至l*106个/ml，注入供传的昆明种小鼠腹腔lml，1周后抽取腹水，以1200r/min的速度离心5min，弃上清，保留下层糊状细胞浆备用。

1.2 小鼠移植性肝癌模型制作

除正常对照组外的所有小鼠术前禁食12h，10%水合氯醛0.35ml/100g剂量腹腔注射麻醉，仰卧位固定于手术板上，无菌条件下沿腹正中线切开lcm左右，暴露肝脏，托出肝左叶，用lml注射器，抽取备用糊状细胞浆，针头与肝脏表面成30°斜刺入肝脏0.5cm，注入糊状细胞浆0.05ml，拔出针头，棉签压迫无渗血后逐层缝合关腹。

1.3 给药方法

造模24h后开始给药，持续给药10天。正常对照组：生理盐水以0.2ml/只/d，1次/d；肝癌模型组：生理盐水以0.2ml/只/d，1次/d；人参皂苷Rg3组：人参皂苷Rg3(注：人参皂苷Rg3用生理盐水配成混悬液后灌胃)以5mg/kg/d灌胃，1次/d；5-FU组：5-Fu以20mg/kg/d腹腔注射，1次/d；人参皂苷Rg3联合5-Fu组：人参皂苷Rg3以5mg/kg/d灌胃，5-FU以20mg/kg/d腹腔注射，1次/d。

检测指标与方法

给药10天后，采取断颈处死各组动物，正常对照组切取部分肝组织，其余各组切取肝肿瘤组织，固定于10％中性甲醛溶液中，12h后，常规脱水、透明、石蜡包埋、切片，烘箱内烘干后备用。

统计学方法

用SAS 6.12软件进行统计分析，计数资料采用X²检验，P<0.05即认为有统计学意义。

结  果

各组小鼠肝(癌)组织VEGF免疫组化检测及图文分析结果：正常对照组和3个用药组小鼠肝(癌)组织VEGF表达水平均低于肝癌模型组(均P<0.05)；在3个用药组小鼠中，人参皂苷Rg3组和人参皂苷Rg3联合5-FU组小鼠肝癌组织VEGF表达水平均低于5-FU组(均P<0.05)；而人参皂苷Rg3联合5-Fu组小鼠肝癌组织VEGF表达水平虽比人参皂苷Rg3组低，但两者比较差异无显著性意义(P>0.05)。详见表1及插页彩图1(A～E)。

表1 各组小鼠肝(癌)组织VEGF的表达水平情况

 图1各组小鼠肝(癌)组织VEGF的表达

(免疫组化，*400)

讨  论

在本实验中设立正常对照组和肝癌模型组，通过观察人参皂苷Rg3和5-Fu单独应用时对小鼠肝癌细胞凋亡及血管形成的影响，结果发现两药均能降低VEGF表达水平，抑制肝肿瘤血管形成。人参皂苷Rg3抑制肝肿瘤血管形成的作用更明显。