人参皂苷Rg3、索拉非尼和奥沙利铂不同联合方式抗裸鼠肝癌移植瘤血管生成的作用研究

人肝癌高转移模型的建立

选取复旦大学肝癌研究所构建的高转移人肝癌裸鼠模型(LCID20)瘤源，以2mm×1mm碎块植入裸鼠肝内，缝合固定于肝左叶实质内，全层关腹，SPF级条件饲养。

分组和给药

60只荷瘤裸鼠随机分成8组，分别为人参皂苷Rg3组(A组)、奥沙利铂组(B组)、索拉非尼组(C组)、人参皂苷Rg3+索拉非尼组(D组)、人参皂苷Rg3+奥沙利铂组(E组)、奥沙利铂+索拉非尼组(F组)、人参皂苷Rg3+奥沙利铂+索拉非尼组(G组)和生理盐水对照组(H组)，其中A、C、D、H组各7只，B、E、F、G组各8只，分笼饲养。肿瘤接种后第11天后开始给药，药物用法如下：人参皂苷Rg35mg/kg，每天1次，14天；奥沙利铂5mg/kg，2天1次，14天；索拉非尼30mg/kg，每天1次，14天；人参皂苷Rg3、奥沙利铂为腹腔注射，索拉非尼为灌胃。14天后处死裸鼠并在无菌条件下完整剥取肝移植瘤备用。

检测指标与方法

检测各组瘤组织中微血管密度(MVD)，免疫组化染色和Western blotting检测各组瘤组织中血管内皮生长因子(VEGF)、缺氧诱导因子(HIF)-1α和VEGF受体(VEGFR)-2的表达。

统计学处理

采用SPSS17.0版统计学软件对数据进行分析。所有数据均以“均数±标准差”表示，两样本均数比较采用配对t检验，计数资料的比较用卡方检验。以P＜0.05为差异有统计学意义。

免疫组化法检测瘤组织中VEGF、HIF-1α、VEGFR-2蛋白表达

VEGF阳性表达呈棕黄色或棕褐色，定位于胞浆内，HIF-1α是以细胞核、胞浆内呈棕黄色颗粒状着色为阳性，VEGFR-2的阳性表达定位于胞浆内，呈棕黄色或棕褐色。与H组相比，其余各组VEGF蛋白阳性表达率均较低(P＜0.05)；HIF-1α蛋白阳性表达率有所下降，但差异无统计学意义(P＞0.05)；A组、D组、E组的VEGFR-2蛋白阳性表达率显著低于H组(P＜0.05)。见图1～图3、表1。

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各组瘤组织中MVD表达

通过CD34标记血管内皮细胞，阳性表达呈棕黄色或棕褐色。治疗组与H组比较，其余各组的MVD值均有不同程度的下降，差异具有统计学意义(P＜0.01)，但各治疗组间差异无统计学意义(P＞0.05)。见表1、图4。

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Western blotting法检测瘤组织中VEGF、HIF-1α和VEGFR-2蛋白表达

(1)除G组外，其余各组的VEGF表达水平均低于H组，差异具有统计学意义(P＜0.05)；除D组低于G组外(P＜0.05)，其余各治疗组间差异无统计学意义(P＞0.05)。

(2)除G组外，各治疗组HIF-1α和VEGFR-2蛋白表达均低于H组，差异具有统计学意义(P＜0.05)；D组下降最为明显，且低于F组和G组(P＜0.05)。见图5、表2。

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人参皂苷Rg3、奥沙利铂、索拉非尼抗肝癌的作用，与通过调节VEGF、HIF-1α和VEGFR-2蛋白的表达而发挥抗血管生成的作用密切相关，两药联合有明显的协同增效作用，本研究结果为临床科学组合药物以实现综合治疗、提高临床疗效提供了实验依据。

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